內蒙環境監測機構分析到紫外線消毒效果驗證的目的是驗證紫外線對物體表面的消毒效果，并將其作為傳、潔凈室等場所消毒滅菌的輔助手段。

　　紫外線消毒效果驗證：準備工作。

　　1.儀器設備：

　　醫用超凈臺、電熱恒溫培養箱、霉菌培養箱。

　　2.器材：

　　滅菌刻度吸管(1ml，10m1)、滅菌試管、滅菌平皿、酒精燈、載體(1.0×1.0cm玻片)

　　3.材料及試劑：

　　純化水、營養瓊脂培養基、營養肉湯培養基、金黃色葡萄球菌、稀釋劑(0.9%氯化鈉溶液)

　　紫外線消毒效果驗證：驗證工作。

　　1.試驗環境。

　　試驗在潔凈度1萬級以下局部潔凈度100級的單向流空氣區進行，全過程嚴格遵守無菌操作。單向流空氣區。工作臺面和環境定期按照《醫藥工業潔凈室（區）懸浮顆粒試驗方法》現行國家標準進行清潔度驗證。浮游菌和沉降菌。

　　每次操作開始前，打開紫外線照射1小時。

　　2.培養基的制備。

　　營養瓊脂培養基：

　　根據需要，將營養瓊脂培養基粉放入合適的容器中，按配方比例加入純化水，水浴加熱溶解，將pH值調整至7.1±0.2，放入合適的容器中，高壓滅菌器滅菌121℃×15分鐘。

　　營養肉湯培養基：

　　稱營養肉湯培養基20克，加入1000毫升純化水，加熱溶解，加熱至沸騰，冷卻至常溫，分裝在合適的容器中，高壓滅菌器滅菌121℃×15分鐘。

　　3.確定細菌及其孢子和真菌的殺滅作用。

　　制備菌液，將滅菌載體平放在滅菌平皿中進行驗證，通過陽性對比計算結果。

　　合格標準：空白對照應無菌生長；指示菌殺滅率≥99.9%判定為消毒合格。

　　紫外線消毒效果驗證：驗證方法。

　　1.測量輻照強度。

　　1)打開紫外線5min后，用中心波長為253.7nm的紫外線強度測量儀在燈管下垂直1m的中心測量輻照值(uW/cm2)。

　　2)測量時，電壓應穩定在220V。

　　3)普通或低臭氧直管紫外線燈(30W)，在燈管下垂直1m的中心，新燈管。

　　輻照值應≥90uW/cm2。使用中燈管的輻照值應≥70uW/cm2，低于此值者應更換。

　　2.照射劑量。

　　表面消毒接受的照射劑量應滿足殺滅目標微生物的要求。對于大腸桿菌，照射劑量應達到7.5×103uW·s/cm2，對于金黃色葡萄球、白色念珠菌和枯草芽孢桿菌，應達到2.53×104uW·s/cm2。

　　照射劑量計算:照射劑量(uWs/cm2)=紫外燈管強度(uW/cm2)×時間(s)

　　3.確定細菌及其孢子和真菌的殺滅作用。

　　制備菌液:金黃色葡萄球菌新鮮培養物、大腸桿菌新鮮培養物、枯草芽孢桿菌新鮮培養物。

　　新鮮的白色念珠菌培養物。

　　殺滅效果測定：

　　1)將滅菌載體平放在滅菌容器中，每個載體滴注定量細菌懸浮液，均勻涂抹，放入37℃培養箱干燥。打開紫外線5分鐘后，將16個染色玻片平放在滅菌容器中，水平放在適當的距離照射中，在4個不同的間隔時間(15分鐘.30分鐘.45分鐘.60分鐘)取出4個染色玻片，分別放入4個5分鐘洗脫液試管中，振動80次。

　　2)適當稀釋后，取1ml洗脫液，倒入平板，每個染色玻片接種兩個，細菌30~35℃培養48小時，真菌23~28℃培養72小時。

　　陽性對照，除不進行照射處理外，取4個染色玻片，分別放入4個5ml洗脫液試管中，振動80次。其余的按1)操作。

　　最后，根據標準(指示菌殺滅率≥99.9%判定為消毒合格)，記錄驗證結果。

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